大黄附子汤对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜上皮细胞及线粒体结构和功能的影响

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-9133.2016.05.011

中华卫生应急电子杂志 ›› 2016, Vol. 02 ›› Issue (05) : 309 -314. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-9133.2016.05.011

所属专题：文献；

论著

大黄附子汤对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜上皮细胞及线粒体结构和功能的影响

康新¹, 梁正凯², 路晓光¹^,^†(

), 杩奇³, 宋建博⁴, 王逸⁵, 刘杰⁶, 范治伟¹, 宋轶¹, 王鹏⁶

^1. 116001　大连大学附属中山医院急诊医学科
^2. 252000　山东省聊城市人民医院胃肠外科
^3. 116001　大连大学附属中山医院病理科
^4. 116025　大连大学研究生院
^5. 116044　大连医科大学研究生院
^6. 563003　遵义医学院研究生院

收稿日期:2016-01-08 出版日期:2016-10-18
通信作者: 路晓光
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(81202831，81173397，30971626); 大连市医学卫生科学研究计划项目(2012-100)

Effect of Dai Huang Fu Zi Tang on mitochondrial structure and function of intestinal epithelial cells in rats with severe actue pancreatitis

Xin Kang¹, Zhengkai Liang², Xiaoguang Lu¹^,^†(), Qi Feng³, Jianbo Song⁴, Yi Wang⁵, Jie Liu⁶, Zhiwei Fan¹, Yi Song¹, Peng Wang⁶

^1. Department of Emergency Medicine, Zhongshan Hospital, Dalian University, Dalian 116001, China
^2. Department of Gastrointestinal Surgery, Liaocheng People’s Hospital, Shandong Province, Liaocheng 252000, China
^3. Department of Pathology, Zhongshan Hospital, Dalian University, Dalian 116001, China
^4. Graduate School of Dalian University, Dalian 116025, China
^5. Graduate School of Dalian Medical University, Dalian 116044, China
^6. Graduate School of Zunyi Medical College , Zunyi 563003, China

Received:2016-01-08 Published:2016-10-18
Corresponding author: Xiaoguang Lu
About author:
Corresponding author: Lu Xiaoguang, Email: dllxg@126.com

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引用本文：

康新, 梁正凯, 路晓光, 杩奇, 宋建博, 王逸, 刘杰, 范治伟, 宋轶, 王鹏. 大黄附子汤对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜上皮细胞及线粒体结构和功能的影响[J]. 中华卫生应急电子杂志, 2016, 02(05): 309-314.

Xin Kang, Zhengkai Liang, Xiaoguang Lu, Qi Feng, Jianbo Song, Yi Wang, Jie Liu, Zhiwei Fan, Yi Song, Peng Wang. Effect of Dai Huang Fu Zi Tang on mitochondrial structure and function of intestinal epithelial cells in rats with severe actue pancreatitis[J]. Chinese Journal of Hygiene Rescue(Electronic Edition), 2016, 02(05): 309-314.

目的

探讨大黄附子汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜上皮细胞(IEC)结构的保护作用及IEC线粒体功能的影响。

方法

本研究为随机对照试验，将60只健康雄性SD大鼠(体重250～300 g)，采用随机数字表法将大鼠分为对照组、重症急性胰腺炎组(SAP组)和大黄附子汤治疗组(大黄附子汤组)，每组20只。每组再按建模后时间(6、12、24、48 h)分为4个亚组，每个亚组5只。SAP组和大黄附子汤组采用5%牛磺胆酸钠(0.1 mL/100g)胰胆管注射法诱导SAP模型，对照组开腹翻动胰腺数次后关腹。大黄附子汤组大鼠分别于术后0、15、30、45 h以大黄附子汤灌肠(10 mL/kg)，对照组和SAP组在同时间点给予同体积0.9%氯化钠溶液灌肠。各组按各时间点处死动物，左侧股静脉取血测定血清淀粉酶和内毒素变化。采用分光光度计、荧光定量法检测IEC线粒体ATP合成酶、细胞色素C氧化酶(CcO)含量变化，光镜观察小肠上皮组织的形态学变化。

结果

与SAP组相比，大黄附子汤可降低SAP后24 h、48 h的血清淀粉酶水平[24 h：(769.14±456.99) vs (1 399.85±623.40)U/L，P<0.01；48 h：(889.59±209.82) vs(1 562.00±316.19)U/L，P<0.001)。与SAP组相比，大黄附子汤组大鼠血清内毒素在建模后24 h、48 h均有不同程度下降[24 h：(108.78±22.16) vs(168.77±29.25)pg/mL，P<0.01；48 h：(242.90±45.12) vs(124.01±321.45)pg/mL，P<0.001]。与对照组相比，SAP后IEC线粒体ATP合成酶和CcO活性均降低且随病程推移呈递减趋势；经大黄附子汤治疗后IEC线粒体ATP合成酶活性高于同时相点的SAP组[12 h：(19.60±1.67)vs(13.60±2.88)nmol·min^－1·mg^－1 pro，P<0.05；24 h：(17.40±2.79) vs(11.2±2.78) nmol·min^－1·mg^－1 pro，P<0.05；48 h：(18.60±2.07) vs (11.2±1.92)nmol·min^－1·mg^－1 pro，P<0.01],且24 h、48 h线粒体CcO活性高于同时相点SAP组[24 h：(1.56±0.11)vs(1.06 ±0.18)μmol·min^－1·mg^－1；48 h：(1.04±0.31) vs(0.50±0.16)μmol·min^－1·mg^－1，P均<0.01]。SAP后12 h小肠上皮损伤指数开始升高(2.2±0.84 vs 0.60±0.55，P<0.01)，且24、48 h持续性升高；大黄附子汤组可显著降低SAP后48 h小肠上皮损伤指数(1.2±0.45 vs 4.0±1.0，P<0.001)。

结论

大黄附子汤能通过增强大鼠IEC线粒体ATP合成酶和CcO活性，改善IEC线粒体能量代谢和呼吸功能，保护SAP后肠屏障的完整性和功能，降低血清淀粉酶和内毒素含量，缓解SAP病情。

关键词: 大黄附子汤, 重症急性胰腺炎, 肠黏膜上皮细胞

Objective

To investigate the effects of Dai Huang Fu Zi Tang(DHFZT) on mitochondrial structure and function of intestinal epithelial cells (IEC) in rats with severe acute pancreatitis(SAP) .

Methods

sixty SD rats were randomly divided into three groups: sham group, model group and DHFZT treatment group, each group was then divided into 6, 12, 24, 48 h hour-subsets (n=5). Model and DHFZT group made a SAP model by injecting 5% sodium taurocholate (0.1 mL/100 g) in pancreatic bile duct. DHFZT(10 mL/kg) was injected into rat colon by coloclysis at 0, 15, 30, 45 h post-operation in DHFZT group. The pancreas in sham group was overtured several times, and injected with 0.9% saline at the same time point. To test serum amylase and endotoxins and mitochondrial ATP synthase and cytochrome C oxidase of IEC. Observe intestinal epithelial damage index under light microscope.

Results

Compared with sham group, level of serum amylase, endotoxin were significantly increased at 6, 12, 24 and 48 h in SAP group. DHFZT could lowered level of them 24 h and 48 h after SAP. Mitochondrial ATP synthase and cytochrome C oxidase activity of IEC were gradually decreased at 6, 12, 24 and 48 h in SAP group comparison with sham group. After treatment with DHFZT, the level of mitochondrial ATP synthase and cytochrome C oxidase of IEC were obviously enhanced at 12, 24, 48 h after SAP. In addition, DHFZT could reduce the intestinal epithelium damage index at 48 h after SAP.

Conclusion

DHFZT could enhance mitochondrial ATP synthase and cytochrome C oxidase activity of IEC after SAP, and improve mitochondrial energy metabolism and respiratory function, reduce serum endotoxin and alleviate intestinal mucosal epithelial injury.

Key words: Dai Huang Fu Zi Tang, Severe Acute Pancreatitis, Intestinal epithelial cells

图1 实验流程示意图

表1 大鼠小肠上皮损伤指数分级标准

评分	病理改变
0	正常
1	绒毛顶端上皮下间隙增宽
2	绒毛顶端上皮下间隙进一步扩大，绒毛尖端上皮太高，与固有膜剥离
3	绒毛上皮成块脱离
4	上皮完全脱落
5	固有层崩解，出现出血与溃疡

表1 大鼠小肠上皮损伤指数分级标准

评分	病理改变
0	正常
1	绒毛顶端上皮下间隙增宽
2	绒毛顶端上皮下间隙进一步扩大，绒毛尖端上皮太高，与固有膜剥离
3	绒毛上皮成块脱离
4	上皮完全脱落
5	固有层崩解，出现出血与溃疡

图2 对照组、SPA组、大黄附子汤组大鼠血清淀粉酶水平的变化

图3 对照组、SPA组、大黄附子汤组大鼠血清内毒素水平的变化

图4 对照组、SPA组、大黄附子汤组大鼠IEC线粒体ATP合成酶活性的变化

图5 对照组、SPA组、大黄附子汤组大鼠IEC线粒体CcO活性的变化

图6 对照组、SPA组、大黄附子汤组大鼠小肠上皮损伤指数

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