大黄附子汤对大鼠失血性休克复苏后肠黏膜屏障的保护作用

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-9133.2016.01.011

中华卫生应急电子杂志 ›› 2016, Vol. 02 ›› Issue (01) : 37 -42. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-9133.2016.01.011

所属专题：文献；

论著

大黄附子汤对大鼠失血性休克复苏后肠黏膜屏障的保护作用

郭帅¹, 路晓光²^,^†(

), 战丽彬³, 范治伟², 宋轶², 吕春雨⁴, 白黎智²

^1. 116200　辽宁大连，大连医科大学附属第三医院普外科
^2. 116001　辽宁大连，大连大学附属中山医院急诊医学科
^3. 210046　江苏南京，南京中医药大学基础医学院
^4. 276827　山东日照，日照市人民医院普外科

收稿日期:2016-01-28 出版日期:2016-02-18
通信作者: 路晓光
基金资助:
国家自然科学基金项目(81473512，81173397，30971626); 大连市卫生局课题(大卫2014)

Protective effect of Dahuangfuzi decoction on intestinal barrier after hemorrhagic shock in rats

Shuai Guo¹, Xiaoguang Lu²^,^†(), Libin Zhan³, Zhiwei Fan², Yi Song², Chunyu Lv⁴, Lizhi Bai²

^1. Department of General Surgery, Third Affiliated Hospital, Dalian Medical University, Dalian 116200, China
^2. Department of Emergency Medicine, Affiliated Zhongshan Hospital, Dalian University, Dalian 116001, China
^3. Department of basic medical college, Nanjing University of Chinese Medicine, Najing 210046, China
^4. Department of General Surgery, People’s Hospital of Rizhao, Shandong 27682, China

Received:2016-01-28 Published:2016-02-18
Corresponding author: Xiaoguang Lu
About author:
Corresponding author: Lu Xiaoguang, Email: dllxg@126.com

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引用本文：

郭帅, 路晓光, 战丽彬, 范治伟, 宋轶, 吕春雨, 白黎智. 大黄附子汤对大鼠失血性休克复苏后肠黏膜屏障的保护作用[J/OL]. 中华卫生应急电子杂志, 2016, 02(01): 37-42.

Shuai Guo, Xiaoguang Lu, Libin Zhan, Zhiwei Fan, Yi Song, Chunyu Lv, Lizhi Bai. Protective effect of Dahuangfuzi decoction on intestinal barrier after hemorrhagic shock in rats[J/OL]. Chinese Journal of Hygiene Rescue(Electronic Edition), 2016, 02(01): 37-42.

目的

探讨大黄附子汤对大鼠失血性休克(hemorrhagic shock，HS)复苏后小肠黏膜屏障功能保护作用的机理。

方法

健康清洁级雄性SD大鼠，72只，随机数字表法分为对照组、模型组、治疗(大黄附子汤)组，各组再按HS模型制备成功复苏后0、6、12 h分为3个亚组，每组8只。模型组、治疗组采用Wiggers改良法制备HS大鼠模型，模型组以0.9%等渗盐水保留灌肠，治疗组予以大黄附子汤保留灌肠。分别于上述三个时段测定血清中肠脂肪酸蛋白(IFABP)水平及内毒素(LPS)含量；光镜观察大鼠肠黏膜病理改变；Western blot与免疫组化法测定黏膜闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1，ZO-1)、磷酸化血管扩张刺激磷蛋白(phospho-VASP，p-VASP)蛋白表达。

结果

治疗组与模型组比较，随时间推移肠道血流增加[ (119.28±6.50) bpu vs (99.99±0.81) bpu，P<0.01]，血清内毒素(LPS)、脂肪酸结合蛋白(IFABP)含量逐渐减低[(21.23±3.33) ng/mL vs (27.09±3.55) ng/mL，P<0.01；(0.420±0.059) ng/mL vs (0.645±0.058) ng/mL，P<0.01]，肠道黏膜损伤程度逐渐减轻[(1.78±0.24) vs (3.64±0.25)，P<0.01]，p-VASP蛋白表达下调[(0.106±0.030) vs (0.297±0.045)，P<0.01]，ZO-1表达上调[(0.82±0.047) ng/mL vs (0.61±0.041) ng/mL，P<0.01]。

结论

大黄附子汤可减轻失血性休克复苏后肠道粘膜屏障损伤，可能与调控p-VASP、ZO-1蛋白表达有关。

关键词: 大黄附子汤, 失血性休克, 肠道屏障, p-VASP, ZO-1

Objective

To investigate the protective effect of Dahuangfuzi decoction on intestinal epithelial tight junction after hemorrhagic shock.

Methods

Seventy-two SD rats were allocated to sham operation group, hemorrhagic shock controlgroup, Dahuang Fuzi Decotion group according to random number table, and each group was divided into three subgroups according to the time point of 0, 6, 12 h after HS and resuscitation. The rat model of hemorrhagic shock was induced by using the improved Wiggers method.Model group and Dahuang Fuzi Decotion group were given physiological saline or Dahuang Fuzi Decotion 2ml retention enema after the post-resuscitation. At three time points, the level of intestinal fatty acid binding protein (IFABP) in the serum was tested by ELISA method, and the levels of serum endotoxin (LPS) was detected by dynamic turbidimetric method. The morphological changes of small intestinal mucosa in rats was observed under light microscope, while p-VASP and ZO-1 expression was observed by Western blot and immunohistochemical method.

Results

Compared with model group, the intestinal blood flow was increased [ (119.28±6.50) bpu: (99.99±0.81) bpu, P<0.01], serum endotoxin (LPS), fatty acid binding protein (IFABP) content gradually reduced [(21.23±3.33) ng/mL: (27.09±3.55) ng/mL, P<0.01; (0.420±0.059) ng/mL: (0.645±0.058) ng/mL, P<0.01] were reduced, and the intestinal mucosa damage[(1.78±0.24): (3.64±0.25), P<0.01] was alleviated, p-VASP protein expression [(0.106±0.030): (0.297±0.045), P<0.01], ZO-1 expression [(0.82±0.047) ng/mL: (0.61±0.041) ng/mL, P<0.01] was up-regulated.

Conclusion

Dahuangfuzi decoction can significantly protect the intestinal mucosal barrier function by regulating p-VASP, ZO 1 protein expression after hemorrhagic shock and resuscitation.

Key words: Dahuangfuzi decoction, Hemorrhagic shock, Intestinal barrier, P-VASP, ZO-1

表1 小肠上皮损伤指数分级标准

评分	病理改变
0	正常
1	绒毛顶端上皮下间隙增宽
2	绒毛顶端上皮下间隙进一步扩大，绒毛尖端上皮抬高，与固有膜剥离
3	绒毛上皮成块脱落
4	上皮完全脱落
5	固有层崩解，出现出血与溃疡

表1 小肠上皮损伤指数分级标准

评分	病理改变
0	正常
1	绒毛顶端上皮下间隙增宽
2	绒毛顶端上皮下间隙进一步扩大，绒毛尖端上皮抬高，与固有膜剥离
3	绒毛上皮成块脱落
4	上皮完全脱落
5	固有层崩解，出现出血与溃疡

表2 对照组、模型组、大黄附子汤组大鼠血清LPS含量变化(±s，pg/L)

组别	鼠数	HS后时间(h)
组别	鼠数	0	6	12
对照组	8	6.51±2.11	6.32±1.99	6.46±1.86
模型组	8	41.45±3.32^a	35.13±3.67	27.09±3.55
大黄附子汤组	8	42.09±2.56	30.58±3.34^c	21.23±3.33^d

表2 对照组、模型组、大黄附子汤组大鼠血清LPS含量变化(±s，pg/L)

组别	鼠数	HS后时间(h)
组别	鼠数	0	6	12
对照组	8	6.51±2.11	6.32±1.99	6.46±1.86
模型组	8	41.45±3.32^a	35.13±3.67	27.09±3.55
大黄附子汤组	8	42.09±2.56	30.58±3.34^c	21.23±3.33^d

表3 对照组、模型组、大黄附子汤组大鼠血清IFABP含量变化(±s，ng/mL)

组别	鼠数	HS后时间(h)
组别	鼠数	0	6	12
对照组	8	0.077±0.009	0.078±0.011	0.082±0.009
模型组	8	0.843±0.085^a	0.765±0.034	0.645±0.058
大黄附子汤组	8	0.758±0.045	0.663±0.030^c	0.420±0.059^d

表3 对照组、模型组、大黄附子汤组大鼠血清IFABP含量变化(±s，ng/mL)

组别	鼠数	HS后时间(h)
组别	鼠数	0	6	12
对照组	8	0.077±0.009	0.078±0.011	0.082±0.009
模型组	8	0.843±0.085^a	0.765±0.034	0.645±0.058
大黄附子汤组	8	0.758±0.045	0.663±0.030^c	0.420±0.059^d

图1 对照组、模型组和大黄附子汤组小肠HE染色组织病理学表现(HE×400)

表4 对照组、模型组、大黄附子汤组大鼠小肠组织学评分(±s)

组别	鼠数	HS后时间(h)
组别	鼠数	0	6	12
对照组	8	0.34±0.10	0.33±0.09	0.31±0.11
模型组	8	4.64±0.28^a	4.01±0.21	3.64±0.25
大黄附子汤组	8	4.59±0.30	3.73±0.25^c	1.78±0.24^d

表4 对照组、模型组、大黄附子汤组大鼠小肠组织学评分(±s)

组别	鼠数	HS后时间(h)
组别	鼠数	0	6	12
对照组	8	0.34±0.10	0.33±0.09	0.31±0.11
模型组	8	4.64±0.28^a	4.01±0.21	3.64±0.25
大黄附子汤组	8	4.59±0.30	3.73±0.25^c	1.78±0.24^d

图2 各组大鼠小肠ZO-1、P-VASP蛋白表达情况。A/E＝β-actin；B/F＝ ZO-1/P-VASP对照组6 h、12 h；C/G＝ZO-1/P-VASP模型组6 h、12 h；D/H＝ZO-1/ P-VASP治疗组6 h、12 h。

图3 对照组、模型组和大黄附子汤组ZO-1免疫组化表达(HE×200)

图4 对照组、模型组和大黄附子汤组P-VASP免疫组化表达(HE×200)

表5 对照组、模型组、大黄附子汤组大鼠小肠ZO-1、P-VASP蛋白表达情况(±s)

时间/组别		鼠数	Western Blot/免疫组化评分
时间/组别		鼠数	0 h	6 h	12 h
ZO－1		?	?	?	?
?	对照组	6	0.85±0.08	0.84±0.05	0.84±0.04
?	对照组	6	6.39±0.35	5.96±0.42	6.02±0.24
?	模型组	6	0.54±0.08^a	0.60±0.03	0.61±0.04
?	模型组	6	3.22±0.25^a	3.03±0.61	2.96±0.48
?	治疗组	6	0.79±0.10	0.80±0.05^c	0.82±0.05^d
?	治疗组	6	4.89±0.17	4.96±0.53^c	5.36±0.23^d
P－VASP		?	?	?	?
?	对照组	6	0.061±0.02	0.073±0.01	0.071±0.03
?	对照组	6	0.41±0.17	0.39±0.28	0.40±0.34
?	模型组	6	0.308±0.01^a	0.310±0.02	0.297±0.05
?	模型组	6	3.76±0.22^a	3.50±0.13	3.11±0.42
?	治疗组	6	0.264±0.01	0.201±0.02^c	0.106±0.030^d
?	治疗组	6	3.49±0.06	2.40±0.11^c	1.92±0.19^d

表5 对照组、模型组、大黄附子汤组大鼠小肠ZO-1、P-VASP蛋白表达情况(±s)

时间/组别		鼠数	Western Blot/免疫组化评分
时间/组别		鼠数	0 h	6 h	12 h
ZO－1		?	?	?	?
?	对照组	6	0.85±0.08	0.84±0.05	0.84±0.04
?	对照组	6	6.39±0.35	5.96±0.42	6.02±0.24
?	模型组	6	0.54±0.08^a	0.60±0.03	0.61±0.04
?	模型组	6	3.22±0.25^a	3.03±0.61	2.96±0.48
?	治疗组	6	0.79±0.10	0.80±0.05^c	0.82±0.05^d
?	治疗组	6	4.89±0.17	4.96±0.53^c	5.36±0.23^d
P－VASP		?	?	?	?
?	对照组	6	0.061±0.02	0.073±0.01	0.071±0.03
?	对照组	6	0.41±0.17	0.39±0.28	0.40±0.34
?	模型组	6	0.308±0.01^a	0.310±0.02	0.297±0.05
?	模型组	6	3.76±0.22^a	3.50±0.13	3.11±0.42
?	治疗组	6	0.264±0.01	0.201±0.02^c	0.106±0.030^d
?	治疗组	6	3.49±0.06	2.40±0.11^c	1.92±0.19^d

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